您好欢迎来到试剂仪器网 [登录] [免费注册]
试剂仪器网
位置首页 > 资料中心 > 技术文章 > 文章内容
浅议鲎试验法中不容忽视的几个问题
作者褚衍立,张淑英,张淑梅   2019.06.11   点击204次

目前细菌内毒素检查法(鲎试验法)应用于临床药物检验日益广泛为确保检验的准确性现简述几个不容忽视的问题

1鲎试剂灵敏度复核问题

中国药典1995版已明确规定在鲎试验前需进行鲎试剂灵敏度复核计算标准差S应小于0.365鲎试剂灵敏度:0.5bܦˡ 2b(b为厂家标示值)据笔者所见使用鲎试剂检查内毒素的单位均不进行复核试验而不同厂家生产的鲎试剂质量不尽相同据笔者复核几家鲎试剂显示试验为阳性的检品家兔法复核并无热原反应厦门鲎试剂厂的鲎试剂质量较好复核试验的灵敏度与标示灵敏度基本一致以上情况应引起用户注意否则会影响结果的准确性

2干扰试验

干扰试验是评价样品浓度对鲎试剂及内毒素凝集反应的干扰程度与性质?#21592;?#21021;步筛选出对检查无干扰样品的浓?#30830;?#22260;若干扰试验存在干扰应注意最大?#34892;?#31232;释MVD与最小?#34892;?#27987;度MVC的计算

其计算方法如下:

MVC=ˡ m/k式中为鲎试剂灵敏度m为?#27809;?#20154;的最大剂量/kgK为规定给药途径临?#21442;?#20219;何不良反应的内毒素阈值静脉为5.0 Eukg-1(包括皮内皮下腔内)鞘内为0.2 Eukg-1

MVD=样品浓度/MVC或MVD=L/式中L为样品内毒素限值)若鲎试剂的灵敏度= 0.25 Euml-1人的最大剂量为30 mgkg-1或2 mlkg-1(样品浓度为15 mgml-1)则:MVC=0.25 Euml-1 30 mgkg - 15.0EuKg-1= 1.5mgml-1MVD=15mgml - 11.5mgml-1= 10倍或:MVD=L=km=5EuKg - 12mlKg - 1 0.25Euml-1= 10倍

在进行干扰试验?#20445;?#22914;样品以基准稀释倍MVD为起点等倍往下稀释应根据出现阳性反应的稀释倍数求出适合这种稀释倍数的鲎试剂灵敏度如某样品的基准稀释倍数为5倍L值= 2.5 Euml-1;于5倍10倍稀释并未出阳性而稀释20倍?#22791;?#25200;试验阳性那?#35789;?#21512;做20倍稀释的干扰试验的鲎试剂灵敏度:b=LMVD20=2.5Euml - 120= 0.125Euml-1即这种样品应以灵敏度为0.125Euml的鲎试剂进行干扰试验

3PH值问题

鲎试验最?#23460;pH值为6.48.0pH值过大过小都影响鲎试剂灵敏度及内毒素活性最简单解决pH值干扰的方法是稀?#22270;?#23569;干扰;在样品中加入预?#28909;?#23450;量的酸碱中和再稀释或采用具有缓冲作用的鲎试剂

4鲎试验中细菌内毒素的振荡问题

中国药典1995年版规定:内毒素复溶后应置旋涡混合器振荡15 min以后每稀释一步需混合振荡0.5 min但是目前多数试验单位没?#34892;?#28065;混合器只轻轻?#35098;?#25110;不?#35098;?#30452;接进行试验某厂家报道若采用旋涡混合振荡法稀释内毒素效价测定结果与国际参考标准内毒素(IS)基本一致若不经振荡稀释则内毒素效价比国际参考标准内毒素低(5075)%原因是内毒素是亲水与疏水双重活性的两性分子脂性端LipidA端是脂多糖(LPS)的主要毒性部位在实验中与鲎试剂反应复溶后如果不剧烈振荡Lipid A端由于疏水内毒素易形成泡状囊Lipid A位于囊的中心而不能与鲎试剂充分接触影响阳性对照结果误以为实验失败

5药物中细菌内毒素限值L

L值是指单位药物中所含内毒素的最大允许量药品所含内毒素低于这个限值?#20445;?#25353;指定途径给药?#21069;?#20840;的内毒素限量L= km-1式中k为内毒素阈值m为药品家兔注射剂量以mlkg-1mgkg-1ukg-1等表示

6鲎试验的环境问题

1995年版药典只规定在实验中防止微生物污染而没有作详细环境规定试验者往往在未经净化处理的环境中试验造成实验失败笔者几年的经验证明鲎试验在净化工作台内进行并进行?#32454;?#30340;操作者消毒与隔离效果是满意的

7鲎试验器具的选择与处理

试验器具对试验结果有直接影响采用一次性针管不符合规定采用聚丙烯试管也不恰当笔者认为采用玻璃试管及金属针头清洁?#33322;?#27873;玻璃试管洗涤剂浸泡金属针头蒸馏水冲洗至pH呈中性于250干烤30 min实验无失败现象

8实验鲎试剂灵敏度选择

为了保证内毒素检查与家兔试验结果相一致鲎试剂灵敏度应不超过0.5Euml-1

本文来自山东省巨野县人民医院
相关技术文章
相关产品
凝胶法鲎试剂
关注(2869)
特异性鲎试剂
关注(1968)
显色基质鲎试剂盒
关注(1912)
动态显色法鲎试剂
关注(1823)
动态?#23884;?#27861;鲎试剂
关注(1825)
真菌葡聚糖检测试剂盒动态?#23884;?#27861;
关注(1758)
平台服务广告服务关键词服务网站建设用户反馈友情链接版权声明联系我们
版权所有未经书面授权所有页面内容不得以任何?#38382;?#36827;行复制
CNReagent.com CopyRight © 2003-2019,All Rights Reserved
Ʊ26ѡ5ʱ